Logo et.boatexistence.com

Miks tuleb pädevaid rakke jääl hoida?

Sisukord:

Miks tuleb pädevaid rakke jääl hoida?
Miks tuleb pädevaid rakke jääl hoida?

Video: Miks tuleb pädevaid rakke jääl hoida?

Video: Miks tuleb pädevaid rakke jääl hoida?
Video: Riigikogu 11.04.2023 2024, Mai
Anonim

Hoidke neid KÜLMAS! Pädevate rakkude valmistamise protsess on keeruline, kuna rakud peavad jääma külmaks. See on ülioluline, sest rakud on nii tundlikud ja haprad, kui neid pädevaks muudetakse Temperatuuri madalal hoidmine aitab vältida rakusurma töötlemise ajal.

Miks hoitakse reaktsioone transformatsioonikatse ajal jääl?

Plasmiid-rakkude segu kuumutatakse seejärel korraks temperatuurini 45–50 °C, võimaldades DNA-l siseneda rakku läbi purunenud membraani. Kuumutatud segu asetatakse seejärel tagasi jääle , et säilitada plasmiidid bakterite sees … Kui plasmiidse DNA lahuses on liiga palju soola, võib tekkida kaar, mis kahjustab transformatsiooni.

Miks te asetate torud jääle?

Miks te arvate, miks me torud jääle panime? DNA viimiseks bakteritesse peame neisse keemilise k altsiumkloriidi (CaCl2) abil augud torkima. … DNA sisse torgatud augud jätavad bakterid lekkima. Kui me neid jääl ei hoia, "veritsevad" nad surnuks.

Milline roll on jääkülmal k altsiumkloriidil pädevate rakkude valmistamisel?

K altsiumkloriidi kuumašoki transformatsiooniprotsess julgustab bakterirakke ümbritsevast keskkonnast DNA-d omastama. … Jääkülm CaCl2 lahus hõlbustab DNA seondumist raku pinnaga, mis seejärel siseneb rakku pärast lühikest kuumašoki perioodi (3).

Kuidas salvestate pädevaid rakke?

Pädevaid rakke tuleks hoida temperatuuril - 80 °C. Säilitamine temperatuuril -20 °C vähendab oluliselt transformatsiooni efektiivsust (TE). NEB 5-alfa kompetentse E. coli (NEB C2987H) testimisel kaotasid rakud 94,5% TE-st juba pärast 24-tunnist säilitamist temperatuuril -20 °C.

Soovitan: