Vortexing ei lõika teie RNA-d ära, muutes selle kasutuskõlbmatuks, kui teete juhuslikku praimivat RT-d – ainult siis, kui soovite pikka mRNA-d kloonida. Invitrogeni tehniline tugi on samuti õige. Kloroform on raskem kui Trizol ja vajub toru põhja.
Kas RNA-d keerisesse segada on ohutu?
Ärge loksutage Trizoli lüsaate ega RNA proove, et vältida lõikamist. Pärast ekstraheerimist hoidke RNA proove kogu aeg jääl. See protokoll on mõeldud proovide jaoks, mis on lüüsitud 1 ml Trizoli 1,5 või 2 ml tuubis.
Kas saate RNA-d soojendada?
Seetõttu vältige kõrgeid temperatuure ( üle +65°C), kuna need mõjutavad RNA terviklikkust. Selle asemel kuumutage RNA-d sekundaarsete struktuuride väljasulamiseks denatureerivate puhvrite juuresolekul temperatuuril +65 °C 15 minutit.
Kuidas RNA pelleteid resuspendeerida?
suspendeerige pellet uuesti sooja veega (40–50 kraadi Celsiuse järgi). inkubeerige 45 kraadi juures 10 minutit. pane need in +4 4–6 tunniks.
Kuidas RNA-d sadestada?
A.
Pärast soolakontsentratsiooni reguleerimist võib RNA-d sadestada 2,5 mahuosa etanooli või 1 mahuosa isopropanooli lisamisega ja hoolik alt segades, millele järgneb jahutamine vähem alt 15 minutit temperatuuril -20 °C.
