Restriktsiooniga lõhustamine saavutatakse sihtmärk-DNA molekuli inkubeerimisel restriktsiooniensüümidega – ensüümid, mis tunnevad ära ja seovad spetsiifilisi DNA järjestusi ning lõhustuvad spetsiifiliste nukleotiidide juurest kas äratundmisjärjestuse sees või väljaspool tuvastusjärjestusest.
Kuidas restriktsiooniensüümid seedivad?
Restriction Enzyme Digest Protocol
- Lisage puhtasse torusse komponendid näidatud järjekorras: …
- Inkubeerige reaktsiooni seedimistemperatuuril (tavaliselt 37 °C) 1 tund.
- Peatage seedimine kuumuse inaktiveerimisega (65 °C 15 minutit) või 10 mM lõppkontsentratsiooniga EDTA lisamisega.
Kas restriktsiooniensüüm seedib DNA-d?
Restriktsiooniensüüme saab kasutada ka PCR-toodete ühilduvate otste loomiseks. … Kõikidel juhtudel kasutatakse ühte või mitut restriktsiooniensüümi DNA seedimiseks, mille tulemuseks on kas suunatult või suunatult sisestatud ühilduvasse plasmiidi.
Kuidas DNA restriktsiooniensüümid töötavad?
Kuidas restriktsiooniensüümid töötavad? Nagu kõik ensüümid, töötab ka restriktsiooniensüüm kujult kuju sobitades Kui see puutub kokku DNA järjestusega, mille kuju ühtib ensüümi osaga, mida nimetatakse äratundmiskohaks, see keerdub ümber DNA ja põhjustab katkestuse DNA molekuli mõlemas ahelas.
Milline ensüüm seedib DNA-d?
Neid ensüüme nimetatakse restriktsiooniendonukleaasideks või restriktsiooniensüümideks ja nad on võimelised lõikama DNA molekule kohtades, kus esinevad teatud lühikesed aluste järjestused.
