Kui teie valk ei ole sama suur kui teie antikeha, võite elueerida 0,1M glütsiiniga, pH 2–3 ja seejärel eraldada huvipakkuv valk antikehast, kasutades SEC-i. (nagu superdex 200).
Mis elueerib valku?
Valgud elueeritakse orgaanilise lahusti, näiteks atsetonitriili, suurenevate koguste gradiendiga. Valgud elueeruvad vastav alt nende hüdrofoobsusele. Pärast HPLC-ga puhastamist on valk lahuses, mis sisaldab ainult lenduvaid ühendeid, ja seda saab kergesti lüofiliseerida.
Miks on valkudel madal pH elueerimine?
Madala pH-ga puhvri kasutamine valgu A elueerimiseks teadaolev alt aitab kaasa toodete agregatsioonile Piiratum hulk tõendeid viitab siiski sellele, et madal pH ei pruugi olla ainus valgu A kromatograafias agregatsiooni põhjus, pigem võivad protsessi muud tahud oluliselt kaasa aidata.
Kuidas elueerimine toimub?
Analüütilises ja orgaanilises keemias on elueerimine protsess, mille käigus ekstrakteeritakse üks materjal teisest, pestes lahustiga; nagu laetud ioonivahetusvaikude pesemisel kinnipeetud ioonide eemaldamiseks. … Pärast seda, kui lahusti molekulid on analüüdi välja tõrjunud, võib analüüdi kolonnist analüüsiks välja viia.
Kui palju antikehi vajate Coipi jaoks?
Tavaliste Co-IP katsete puhul on minu kasutatud antikeha mitte rohkem kui 2 ug (minu komplektis piisab 1,4–2,0 ug antikehast 2500–5000 ug antikeha hõivamiseks valgulüsaat.) Kuid see sõltub ikkagi teie proovides sisalduvate sihtvalkude ekspressioonitasemest, seega peate tõenäoliselt tegema mõningaid muudatusi.
