Järgmine on ülevaade kaudse immunofluorestsentsvärvimise protokolli erinevatest etappidest
- Katse planeerimine ja proovide ettevalmistamine. …
- Näidiskinnitus. …
- Rakkude läbilaskvus. …
- Blokeerimine. …
- Primaarsete antikehade inkubeerimine. …
- Sekundaarne antikehade inkubeerimine. …
- Treit ja paigaldus.
Kuidas te immunofluorestsentsi teostate?
Kõik inkubatsioonietapid toimuvad toatemperatuuril
- Peske rakke kaks korda ja asetage pintsettide abil ettevaatlikult ümberpööratud rakkudega katteklaas niisutatud kambrisse.
- Fikseerige 4% formaldehüüdiga 10 minutit ja peske 3 ×.
- Permeabiliseerige 0,1% TX-100/PBS-iga 15–20 minutit ja peske 3 ×.
Kuidas kasutada immunofluorestsentsi rakus?
Adherentsete rakkude immunofluorestsentsprotokoll
- Külvake 1–1,5 x104 rakku 4-kambrilise objektiklaasi süvendi kohta 500 ml kultuurisöötmes. Inkubeerida 37°C juures 5% CO2.
- 32–36 tundi pärast rakkude külvamist eemaldage rakukultuuri sööde ja loputage rakke 3 korda, kasutades 500 µL 1X PBS-i.
Mis on immunofluorestsentsi näide?
Näiteks võib teadlane luua kitses primaarsed antikehad, mis tunnevad ära mitu antigeeni, ja seejärel kasutada värvainega seotud küüliku sekundaarseid antikehi, mis tunnevad ära kitse antikehade konstantse piirkonna ( küüliku kitsevastased antikehad).
Mis kasu on immunofluorestsentsvärvimisest?
Immunofluorestsentsvärvimine (IF) on bioloogilistes uuringutes ja kliinilises diagnostikas laialdaselt kasutatav tehnika IF kasutab spetsiifiliste sihtantigeenide tuvastamiseks fluorestsentsmärgistatud antikehi. Sellele järgneb pildistamine, see on väga otsene tehnika, kuna näete midagi.
